L-脫氫抗壞血酸

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L-脫氫抗壞血酸

操作流程：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

優點如下:

1、快速簡便:操作時間短,48-50T,可測40例樣本左右,96-100T,可測80例樣本左右;

2、取樣量微:常規操作取樣量50l, 酶標儀操作僅需5l即可檢測,部分試劑盒取樣多少請;

3、穩定性好:試劑盒2~8℃存放3個月有效;

4、再現性好:20倍稀釋線性仍然良好;

5、回收試驗: X =99%;

6、受外界影響因素小:干擾因素少,重復性強;

7、測試面廣:可測動物血清(漿)、組織、各種體液、灌流液、各種培養細胞以及細胞培養上清液等,部分試劑盒適用于檢測植物,歡迎

儀器:

1、分光光度計/酶標儀/生化分析儀(比色測定波長為550nm)

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)

3、臺式離心機

4、漩渦混勻器

5、微量移液器

使用須知:

(1)請參照相關法規、文獻、MSDs等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進行安全操作。

(2)通常購買試劑時一定要想到--次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理。

(3)萬一-試劑操作者并非專業技術人員。必須在專業人士的指導監督下進行操作。對于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑，應按照相關法律法規正當處理。

(4)購買后，請務必確認標簽上的注意事項;做好預防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認標簽上的注意事項，做好必要的安全對策;對沒有標明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進行操作;必須帶好防護用具，小心翼翼進行操作。

生化試劑的種類與等級說明:

(1)免疫試劑包括抗體及抗血清、正常血清及補體、抗原、免疫組織化學研究用試劑、細胞培養用試劑、細胞分離試劑、凝膠內擴散法及電泳試劑等。

(2)基因工程用試劑包括基因表達與基因重組、人工合成蛋白、激素、核酸合成試劑、內切酶等。

(3)誘變劑和主要供測定工作場所與生活環境中的毒物質的致癌性與化學毒物的致突變性。

(4)工業用化學品包括試制開發的工業用化學品,有四千種以上,還在不斷增加。

樣本收集與前處理:

血清(漿)可直接測定。

紅細胞:需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。

動物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測定。

培養細胞、細菌、植物組織:常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。

具體的樣本前處理:參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

為了達到準確的實驗結果,取用試劑時應遵守以下規則,以保證試劑不受污染和不變質:

(1)試劑不能與手接觸。

(2)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,*不準用同一種工具同時連續取用多種試劑。取完一種試劑后,應將工具洗凈(藥勺要擦干)后,方可取用另一種試劑。

(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后將瓶放回原處。

(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內。

另外取用試劑時應本著節約精神,盡可能少用,這樣既便于操作和仔細觀察現象,又能得到較好的實驗結果。